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不同品种枇杷果实酚类物质及其抗氧化活性解析

作者:教学论文
出处:www.lunrr.com
时间:2019-10-28

酚类物质是植物重要的次生代谢产物之一。它们广泛存在于植物中并影响植物的质量。由于酚类物质结构中的一个或多个羟基,它们具有良好的清除自由基的能力。强大的抗氧化活性,因此植物酚类物质和抗氧化活性的研究已成为近年来农业研究领域的热点,并已在叶,花,核和果实中得到报道。酚的具体组成和每种成分的含量与抗氧化能力高度相关。在花朵和叶子上也得到了相同的结果。水果中酚的组成研究较少,只有张文娜,徐红霞等人。浙江水果中有10个酚类化合物变种,其他品种尚未见报道。福建是福建的主要产区之一。 2013年,年产量达到23.7万吨。主要品种有红肉,“朝中6号”,“长虹3号”,“集中”和白肉。本实验以“白梨”等四种“果为材料,采用超声波辅助乙醇提取法,DPPH法(DPPH自由基清除法)和FRAP法提取酚类物质。 (铁还原比色法)。为了评估其抗氧化能力,并通过高效液相色谱法分析其酚类成分,研究酚类成分与不同品种水果的抗氧化活性之间的关系,并将其与研究较多的“宁海白”进行比较,以进行深加工提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料与仪器

Put田市水果研究所提供了五种fruit果。根据成熟时间,分为早熟的“肇中6号”,中水“长虹3号”和“宁海白”,中熟的“白梨”和晚熟的“解放钟”,水果是在食物正常成熟后收获的,并在同一天被运送到实验室。将具有相同成熟度,无害虫,无明显损害和完整果实的蟑螂放入-70°C的超低温冰箱中进行储存。茶酸,鞣花酸,咖啡酸,阿魏酸,绿原酸,美国西格玛;新型绿原酸,隐绿原酸,TPTZ(2,4,6-反式2-吡啶基三嗪),DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)上海元业生物技术有限公司;甲醇,乙腈的色谱纯度,国药集团化学试剂有限公司;其他试剂的分析纯度;实验用水超纯水。 Agilent 1100高效液相色谱仪Agilent USA使用紫外检测器ZORBAXSB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm); 722型可见光分光光度计上海光谱仪有限公司;昆山超声仪器有限公司KQ-100DE超声波清洗机; KDC-40低速离心机安徽中科中佳科学仪器有限公司;超纯净水机上海和泰仪器有限公司

1.2实验方法

1.2.1从lo果实中提取酚类物质将果皮去皮并从冰箱中取出后,将果肉快速切成片,精确称量10.000 g,加入30 mL 70%乙醇溶液,浸泡1 h,然后超声提取20 min(温度30°C,功率200 W),然后在5000×g离心20 min,真空过滤得到滤液,滤液用70%乙醇补足至50 mL,为提取物lo果实,用于测定DPPH清除能力和铁离子还原能力及浓度,用于分析酚类物质。

1.2.2总酚含量的测定使用Folin-Ciocaileu比色法测量多酚含量。将1 mL提取物添加到20 mL水中,加入2.5 mL FoLin-CiocaLteu试剂,并在5分钟后添加2.5 mL饱和碳酸钠溶液,最后添加水。将其在50 mL下静置2 h,然后在765 nm下测量吸光度。以没食子酸(GAE)为标准,制作标准曲线,由该标准曲线算出样品中的总苯酚含量,结果表示为样品中所含的没食子酸当量(μg/g FW) 。

1.2.3枸杞提取物的抗氧化能力测试

1.2.3.1 DPPH脱除容量的测定根据文献记载,DPPH乙醇溶液的浓度为2.13×10-4 mol/L,将等体积的DPPH溶液与肼萃取液混合,保护室温下的反应从光在517 nm处照射30分钟。在波长处测量吸光度(Ai);将等体积的DPPH溶液与乙醇混合,测量溶液的吸光度(A0)。将等体积的提取物与乙醇混合,以测量溶液的吸光度(Aj)。记录A0,Ai和Aj,并根据以下公式计算出清除率IP: IP(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100。

1.2.3.2铁离子还原能力的测定提取物的FRAP值参考文献方法进行测试。取1 mL提取物,稀释至25 mL。取1 mL稀释液,并添加2.7 mL FRAP工作溶液(按照1:10:1的比例加入20 mmol/L氯化铁溶液,300 mmol/L乙酸盐缓冲液,10 mmol/L TPTZ溶液),在6在37°C的毫升水中测量593 nm 10分钟。以硫酸亚铁铵溶液为标准液绘制标准曲线,并计算样品的FRAP值,以达到所需的吸收度。单位是mmol/L。

1.2.4 fruit果实提取物的HPLC分析1.2.4.1 HPLC检测条件柱: Kromasil C18(150 mm×4.6 mm);进样量: 20μL;流速: 0.8 mL/min;柱温: 30°C;检测波长: 280 nm;流动相A: 5%乙酸水溶液;流动相B: 100%乙腈。梯度洗脱程序: A在0到25分钟时从90%降低到70%,而A在25到35分钟时从70%升高到90%。

1.2.4.2酚类单体的HPLC分析精确称量7种酚类单体参考物质,并将其溶于色谱纯甲醇中,以制备0.1 mg/mL溶液,以确定保留时间。用0.1 mg/mL的酚单体浓度重新配制混合的参考溶液,并逐步稀释以确定峰面积。计算浓度和峰面积的回归方程,并在溶液测试前通过0.45μm过滤器。

1.2.4.3样品处理和分析取25 mL提取物,减压蒸馏除去乙醇,然后用正己烷萃取3次,减压蒸馏除去正己烷,再用甲醇稀释至5 mL进行HPLC分析。在进行溶液试验之前,使过滤器通过0.45μm的溶液,并通过外标法计算含量。

1.3综合抗氧化剂容量指数(APC)的计算

有关提取物中酚类化合物抗氧化活性的总体比较,请参考文献中有关总体抗氧化能力指数(APC)的计算方法: APC指数=σ[每方法的测量值/(每方法的最大值×测试总数)方法)] 。

1.4数据分析

使用Origin 8.5软件进行数据映射,SPSS 20软件进行数据分析:方差单向分析(ANOVA),Pearson相关分析(Pearson相关分析),将所有测定重复3次。所得结果表示为平均值±标准偏差。

2结果与分析

2.1不同品种of果实总酚含量和抗氧化活性分析

没食子酸的线性回归方程为y=0.0078x + 0.0026,R2=0.9986,线性范围为:4.10-28.67 mg/L。根据回归方程,五个品种的qua果实的总酚含量为327.31至615.22 ug/g(见表1)。 <总酚含量的顺序为“解放中”。 <枣中6号> <宁海白> <“百里”> “长虹三号”。 “宁海白”的总酚含量与冯建军的报告相符,优于徐红霞的报告。较低的结果可能是由于不同的生长环境和成熟度引起的。 “枣中6”和“揭方中”果实的总酚含量几乎是“长虹3”和“百里”果实的两倍,各组之间的差异非常显着。表2显示5个品种的lo果实的提取物具有抗氧化活性,其中DPPH法显示清除能力的顺序为“宁海白”。 <枣中6号> <长虹3> <解放中钟> “百里”,“枣中6”,“解放中”和“百里”; FRAP法表明,“百里”,“枣中6”和“解放中”,“百里”之间存在显着差异;(回归方程为y=0.9686x-0.0333,R2=0.9982,线性范围为: 0.2 -2.0 mmol/L。结果表明,每个品种的抗氧化能力的顺序为“宁海白”。 <枣中6号> <“解放中”> <长虹3> “百里”。 DPPH方法主要评估物质的自由基清除能力,FRAP方法评估物质的自由基清除能力。测试方法不同,反应物质也不同。两种评价结果的不一致表明反应底物可能不同,并且它们的组成可以进一步分析。综合抗氧化能力指数APC显示,福建生产的红肉系“昭中6号”,“解芳中”和“长虹3号”的总抗氧化活性高于白肉“熊梨”。 “号”是福建省的主要品种,其高抗氧化能力表明其在营养和保健方面具有一定优势。

2.2不同品种枇杷果实酚类成分分析

2.2.1不同品种枇杷果实酚类成分的定性和定量分析参考文献报道。通过比较对照品、样品和标准品的保留时间,采用高效液相色谱法对7种酚类物质进行了鉴定。按峰值时间顺序为:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、表儿茶素、咖啡酸。鞣花酸,阿魏酸。绿原酸gt、新绿原酸gt、隐绿原酸gt、表儿茶素gt、阿魏酸gt、咖啡酸gt、鞣花酸和绿原酸的含量均显著高于其他酚类物质,与报道一致。5个品种间含量差异显著,以宁海白最高,早中6号最高。新绿原酸和隐绿原酸的含量顺序为宁海白、早中6、长虹3、解放中、百利,表儿茶素、咖啡酸、鞣花酸和阿魏酸含量较低,且大小顺序因品种而异。总的来说,宁海白6号和早中6号的酚类单体含量较高,百里含量最低;长虹3号和解放中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和表儿茶素含量差异显著,但与对照组相比,长虹3号和解放中的酚类单体含量较低。总含量相似,与总抗氧化能力相似。重合。

2.2.2 of果实抗氧化成分与抗氧化能力的相关分析表明,总酚含量和HPLC测定的总含量与DPPH清除能力和FRAP值呈正相关。总酚含量与DPPH之间的相关性达到显着水平,但酚单体与抗氧化剂能力DPPH和FRAP之间的关系不显着。相同。新绿原酸和绿原酸的含量与DPPH呈正相关(r分别为0.941、0.887,P小于0.05),与FRAP呈正相关。隐绿原酸的含量与DPPH呈正相关(r=0.963,p小于0.01),而与FRAP不呈正相关。表儿茶素的含量与DPPH和FRAP呈适度相关,咖啡酸与DPPH和FRAP呈适度相关,鞣花酸与DPPH呈适度相关,但效果不显着。其他酚类单体与抗氧化剂能力之间的相关性较弱,这可能是由于酚类单体含量低或酚类单体本身的抗氧化剂能力弱所致。

3结论

采用两种方法评价of果实的抗氧化能力。结果表明,“宁海白”的抗氧化能力最高,“百里”的抗氧化能力最低。福建产lo的抗氧化能力为:红果fl果->白色果lo的果实,枣中6号,是最高的。 HPLC分析表明,showed的五个果实中有7种酚类物质,分别是新绿原酸,绿原酸,隐绿原酸,表儿茶素,咖啡酸,鞣花酸和阿魏酸。绿原酸含量最高,其次是新绿原酸和隐绿原酸。这三种酚是主要的抗氧化剂活性酚,与抗氧化能力呈正相关。

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