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中国药典黄曲霉毒素检测过程有关问题解析

作者:农村信息
出处:www.lunrr.com
时间:2019-09-29

黄曲霉毒素(AF)是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的具有相似分子结构的次级代谢产物。它是一种有毒和致癌的化合物。第一类致癌物是人类原发性肝癌的主要致病因素之一。在中药材的生长和储存过程中,如果环境条件合适,将生产霉菌以生产黄曲霉毒素。目前,黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法,高效液相色谱法,酶联免疫吸附法,液相色谱-质谱法等。《中国药典》 2010年版第二增刊采用高效液相色谱柱后衍生化。方法确定。本文讨论了中国药典黄曲霉毒素检测中经常遇到的问题,以及不衍生化而快速检测黄曲霉毒素的方法。

1仪器和试剂

Agilent 1200高效液相色谱仪; Pickering Vector-PCX柱后导数;沃特世ACQUITYUPLC H级系统,带FLR检测器; SB-5200D超声波清洗机(宁波市新志生物技术有限公司); K2042高速离心机(美国); AE-100电子天平(瑞士梅特勒)。免疫亲和色谱柱(A,B,C公司);玻璃纤维滤纸(北京中卫威康科技有限公司);黄曲霉毒素混合参考溶液(美国SUPELCO公司,批号: LB,黄曲霉毒素G2)G1,B2和B1的浓度分别为0.302、0.965、0.306和1.021μg/mL。甲醇和乙腈均为色谱纯,所用的水是纯净水,汕头市美宝药业有限公司提供的滴龙(批号ZY04);广州市中一药业有限公司提供的批号(批号);广州;仁制药的批号(批号B)。广州香雪药业有限公司;白子仁A,B和C分别购自广州大神林,广州同健和广州采芝林药房。

2方法与结果

2.1制备测试溶液

取约5克本产品粉末(通过2号筛),精确称重,加入黄曲霉毒素(AF)是一种类似于黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的分子结构。次生代谢产物是一种有毒致癌的化合物,是第一类致癌物质,是人类原发性肝癌的主要致病因素之一。在中药材的生长和储存过程中,如果环境条件合适,将生产霉菌以生产黄曲霉毒素。目前,黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱,高效液相色谱,酶联免疫吸附测定,液相色谱-质谱联用等。《中国药典》 2010年版第二增刊采用高效液相色谱柱后衍生化。方法确定。本文讨论了中国药典黄曲霉毒素检测中经常遇到的问题,以及不衍生化而快速检测黄曲霉毒素的方法。

2.2无需衍生化的超高效液相色谱和荧光检测器,用于快速检测黄曲霉毒素

2.2.1线性关系,检出限和定量限准确吸收黄曲霉毒素混合标准溶液(黄曲霉毒素B1浓度为102.1 ng/mL),加入50%甲醇使AFB10.204的浓度为每毫升2。0.408 4,2.042 0、6.126 0、20.420 0ng标准溶液,摇匀,即。准确吸取2μL参比溶液,注入色谱仪,记录峰面积,以浓度(ng/mL)为横坐标,以积分值为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程。结果表明,四种黄曲霉毒素的线性关系良好。分别根据进样浓度为3:1和10:1的信噪比来计算检测限和定量限。

2.2.2仪器精密度试验黄曲霉毒素混合标准溶液(B1浓度为0.408 4 ng/mL),连续进样5次,黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的RSD结果分别为0.6%,1.2%,1.0%和0.2%仪器精度好。

2.2.3样品回收率测试取已知含量的桃仁(AFB20.26μg/kg,AFB11.69μg/kg)样品5.0 g,准确称重,分别根据低,中和高浓度分别为2、5 ,按照“ 2.1”的方法制备10 mL黄曲霉毒素混合参考溶液(B1浓度为2.042 ng/mL),测试样品。

2.2.4样品测定取采集到的百子仁样品,按照“ 2.3”的方法配制试验溶液,依法测定,通过标准曲线计算出黄曲霉毒素B1,B2,G1和G2的含量。方法。结果与柱后碘衍生化所获得的结果相差不大。

3讨论

使用0.01%碘溶液,衍生泵流量为0.4 mL/min,与目前中国药典0.05%碘溶液,衍生泵流量为0.3mL/min的衍生效果相似,但降低碘衍生物溶液的浓度,即可实际的检查过程它有效地减少了管道的堵塞,并大大延长了荧光测试仪的使用寿命。免疫亲和柱可以特异性吸附黄曲霉毒素,可以大大减少其他杂质的污染,但中药的化学成分复杂,不同品牌的免疫亲和柱的回收率会有所不同,因此在实际测量过程中,需要根据实际情况选择合适的免疫亲和柱。 AFB1和AFB2在紫外线下会产生蓝绿色荧光。 AFG1和AFG2在紫外线下可产生黄绿色荧光。反相洗脱液会抑制黄曲霉毒素B1和G1的荧光作用,因此通常会检测到AFB1和AFG1。需要导出。通常,AFB1和AFG1的衍生方法主要包括柱前三氟乙酸衍生化,柱后碘溶液,电化学衍生化溴法或光化学UV衍生化,无论是柱前衍生化还是柱后碘(溴)衍生化试剂或额外的设备也可能导致系统污染,而液相色谱-质谱法的测试成本相对较高,并且适合于确认阳性样品。本文尝试通过使用大量的FLR流通池,使用沃特世ACQUITY UPLC H-Class系统来延长黄曲霉毒素在流通池中的停留时间,从而增强黄曲霉毒素的检测信号并达到非导数测定的目的。同时,消除了柱后导数系统和由还原引起的谱带拉伸,形成了峰,并实现了高信噪比,从而确保了更准确的定量。此外,使用UPLC代替HPLC,可缩短分析时间并减少溶剂消耗,从而进行分析。该方法更环保。致谢:感谢Waters Technology(Shanghai)Co.Ltd.协助建立超高效液相色谱-荧光检测器,而无需快速检测黄曲霉毒素。

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