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CD1a、CD209及MHCII在新生儿指皮组织中的研究

作者:学报期刊
出处:www.lunrr.com
时间:2019-09-26

前言

目前,树突状细胞(DC)被认为是激活原代T细胞或启动适应性免疫反应或诱导免疫耐受的最强大和独特的抗原呈递细胞(APC)。它是先天免疫和后天免疫的枢纽。 DC通过模式识别受体参与抗原物质的识别,内化,加工和加工。作为人体最大的器官,皮肤是最重要的天然免疫屏障,也是连接内部和外部环境的枢纽。皮肤树突细胞包括表皮朗格汉斯细胞(LCs)和真皮树突细胞(DDCs)。 LC可以表达CD1a和独特的细胞器-Birbeck粒子(BG)。 DDC进一步分为CD1ahigh/CD4 +/CD14-/CD16-/CD2O6high/CD207/CD209 +细胞和CD1alow/CD4 +/CD14 +/CD16-/CD206low/CD207-/CD209 +细胞。在正常的非炎性条件下,沉积在皮肤中的LC前体细胞主要存在于真皮中,在转化生长因子B(TGF B)和CCL20的共同作用下,LC前体可以通过真正的表皮屏障。 DC是皮肤免疫系统的重要组成部分,可诱导免疫反应或诱导免疫耐受。在这项研究中,使用CD1a,CD209和MHCII进行免疫组织化学染色,并观察了正常新生儿手指皮肤组织中DC的形态,数量和分布。

1材料与方法

1.1材料

从陕西省高新医院送检的尸检病例中,收集5例双手无名指组织(指端组织小块,出生后1天死亡,死亡后24小时送检)的尸检新生儿。组织发育良好,无炎症、坏死和肿瘤。用oct冷冻包埋剂包埋手指皮肤组织进行纵向(垂直)切片观察。鼠抗人cd209单克隆抗体购自研发公司产品(产品编号,工作浓度1:200)。鼠抗人cd1a单克隆抗体购自达科公司(产品编号为f7141,工作浓度为1: 100)。小鼠抗人mhc单克隆抗体购自抗体诊断公司(产品编号m-0305,工作浓度1: 100)。浓度为1:100的第二抗体试剂盒(产品编号sp9002)和dab显色试剂盒(产品编号sp9002)购自北京中山金桥公司。值得指出的是,本研究已经西安交通大学医学伦理学委员会批准,新生儿指尖(指环)样本符合伦理学原则。

1.2切片制备及免疫组化染色

每例新生儿左无名指组织冰冻(厚度3微米),免疫组化染色,dab染色,苏木精重染色;空白对照用pbs单克隆抗体代替,其余染色步骤相同;每例新生儿右无名指组织观察常规石蜡切片、he染色及光镜检查。低倍镜下观察免疫组化染色,高倍镜下观察阳性细胞数。取10个高倍视野,计数阳性细胞,比较阳性细胞的表达。

1.3结果判断

以膜和胞浆中有棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞,以有棕黄色颗粒的轴突为阳性轴突。每片随机分为10个高倍视野(x 400)。每项相加后,以各视野阳性细胞数作为总分。每层阳性细胞数为10视野的平均值。计数阳性细胞和阳性细胞。阳性细胞计数,阳性率计算如下:阳性细胞数=阳性细胞数/总细胞数(x 100)。结果用x(+s)表示。

1.4统计分析

采用spss20.0统计软件对结果进行分析。结果采用X+S卡方检验,各组间比较,P & lt;0.05有显著性差异。

2个结果

2.1病理观察

光镜下,阳性细胞呈棕色,大小形状各异,突起数目不一,呈散在或带状分布。cd1a标记阳性细胞膜呈棕黄色,细胞呈长梭形,长、长、厚不等突起。不同细胞的突起可以相互连接,形状不规则。细胞体大,圆形或椭圆形,树突突起不明显。阳性细胞主要分布在表皮乳头、外膜及真皮疏松结缔组织周围。cd209标记阳性细胞主要分布于真皮、血管神经分岔处、血管外膜和环状小体的囊膜结缔组织中。mhcii标记阳性细胞主要分布在毛乳头和血管外膜周围。细胞呈圆形或梭形,有不同长度和厚度的突起。阴性对照组未见阳性细胞,石蜡切片未见异常改变。

2.2统计结果

cd1a标记dc、cd209标记dc、mhcii标记dc和mhcii标记dc在手指皮肤组织中的阳性率分别为23(+11.9)%、30(+7.7)%、8(+1.9)%。χ2检验显示三组的阳性率不同(x2=299.575)。cd1a和cd209标记的树突状细胞阳性率高于mhcii标记的树突状细胞(p<;0.05)。

3讨论

DC是一种由Steinman和Cohn(1973)从小鼠脾脏组织中分离出来的形态上独特的细胞,以其神经元样树突命名。目前,树突状细胞被认为是体内最强大的细胞,是激活初始T细胞并启动适应性免疫反应的唯一抗原呈递细胞(APC)。它们是先天免疫和后天免疫的枢纽。皮肤LC(Langerhans细胞,LC)表达免疫标记分子Fc R,CR,MHC II和CD207/Langerin,而真皮DC缺乏特异性标记分子。 CD1a是一种抗原呈递分子,可呈递脂质抗原并将脂质抗原递送至T细胞群和T细胞群。目前,它被认为是未成熟DC(imDC)的主要特征标记。表达CD1a的树突状细胞主要为LC,但Nest le等人(2002年)。报告指出约12%至40%的DDC表达CD1a。研究发现,CD1a可能介导肿瘤来源的脂质和糖脂抗原向肿瘤特异性T细胞的呈递,从而促进这些溶细胞的抗肿瘤免疫应答,这些溶细胞存在于各种系统的肿瘤中。表达,但表达机制并不完全相同[1。真皮CD1c + DC和LC都表达CD1a,而人CD1a + DDC在表型和功能上都是异质的。像LC一样,人类CD1a + DDC分泌IL-1并激活原代CD8 + T细胞。但是,与LC不同,人CD1a + DCs表达CD11b并分泌IL-8。 DC-SIGN CD209也称为HIV-1 gp120与C型凝集素结合。在皮肤组织中,表皮层中的CD1a + LC不表达CD209,而真皮层中的DC表达此标记。

研究表明,CD209具有正向和负向双向免疫调节功能。介导外源抗原呈递,DC迁移和T细胞活化,触发人体的免疫反应,并在抗感染免疫和抗肿瘤免疫监视中发挥关键作用;一方面,可以诱导宿主发挥针对各种病原体的免疫力并参与肿瘤细胞的免疫逃逸。 MHC II是可反映DC免疫功能的最重要分子之一。它在成熟的DC中表达,并且是DC识别,摄取抗原和其他免疫细胞信号转导的必要条件。 MHCII分子主要参与外源抗原的识别和呈递。

DC的来源多样,分布广泛并且功能多样,具有高度的异质性。炎症和体内平衡,皮肤DC的分类不同且功能不同。不同的子组具有不同的更新速度。作为抵御外部感染的第一道防线,皮肤组织具有天然的免疫屏障。有必要弄清手指皮肤组织中DC的形式,分布和数量。目前,皮肤DC的大多数研究对象来自动物模型。然而,关于人皮肤DC的体内形态学功能的研究仍不深入,对人皮肤DC在稳态下的分化和功能的了解还很少。在这项研究中,CD1a,CD209和MHCII用于标记新生儿指尖和皮下组织DC的皮肤。显然在表皮乳头,外膜,血管神经分叉,疏松结缔组织和核小泡结缔组织周围。在组织中,阳性细胞是棕色的,大小不同且形状各异,并具有数量,长度和厚度不同的突起,这些突起分散或分布在一条带中。 CD1a和CD209标记的未成熟DC的数量高于MHCII标记的成熟DC的数量。研究发现,在正常情况下,新生儿的皮肤和皮下组织中存在着一组分布不同,形状和功能不同的DC,它们处于不同的生长发育阶段,主要表达未成熟的DC。这丰富了皮肤免疫系统的组成,并为全面了解皮肤DC的异质性和复杂的生物学行为提供了基础。

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2019年09月